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1、 没有接纳到DNA片断
(1)反省漂洗液能否按瓶身标签注明的,参加了指定体积的无水乙醇。
(2)凝胶胶块溶胶不彻底,招致DNA没有开释出来,凝胶附在吸附柱外表致使接纳率极低,乃至没有接纳片断。
(3)上样的DNA总量较少。吸附柱总会残留局部DNA,假如上样量过少,接纳到的DNA就会过少,乃至没有。
2、接纳率偏低
(1)消融DNA的缓冲液与吸附柱打仗时,只要当溶液的pH 值处于酸性形态时,才干到达抱负的吸附结果。溶胶液的pH 值一样平常在6左右,而琼脂糖凝胶偏碱性。当胶块参加溶胶液后,溶胶液的pH 值一定会遭到影响,假如胶块过大时,pH 值降低就更大,DNA接纳率就会低落。以是,尽大概低落胶块体积可以制止接纳率偏低。
(2)电泳缓冲液假如永劫间利用,没有改换,其pH 值会偏高,将影响DNA 的吸附。请改换新的电泳缓冲液后,再举行电泳,然后切胶。
(3)接纳的DNA片断的巨细对接纳率的影响也是差别较大的。一样平常状况下300-200bp以下的小片断,接纳率就会降落,且片断越小,接纳率低落越分明。大的DNA片断,好比4-5kb以上的,接纳率也会降落分明。遇到相似片断时,
1)增长接纳总量;
2)将2-3管溶胶液并入一个吸附柱;
3)洗脱液举行数次循环洗脱
(4)洗脱体积偏少时,接纳率会分明低落。可以依据试剂盒阐明书的要求参加符合的洗脱体积。在举行洗脱前,将洗脱液于30~60℃温浴,可进步洗脱服从。
(5)胶块体积参加偏大或是溶胶不彻底都大概使接纳率极大低落。低落胶块体积或是增长溶胶液体积,同时彻底溶胶会改进接纳率。
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