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一、界说
直接竞争法的模子:包被抗原,用HRP-抗体与样本一同参加。样本中的Ag与Solid-Ag竞争HRP-Ab,固相吸附的HRP-Ab与样本中的Ag浓度成正比。
间接竞争法的模子:包被抗体,用HRP-抗原与样本一同参加。样本中的Ag与HRP-Ag竞争Solid-Ab,固相吸附的HRP-Ag与样本中的Ag浓度成正比。
二、竞争法的实际底子:是限量抗体。只要在限量抗体底子上,两种抗原才会构成竞争干系。
三、直接竞争法具有较高敏捷度缘故原由。
间接竞争法里,标志抗原与待测抗原均是液相,与抗体的联合时机是一样的,比方有1份标志抗原与1份待测抗原竞争1份抗体,那么有50%的标志抗原能与抗体联合,以是标志抗原的绝对联合率为50%。直接法里,固相抗原与抗体的打仗面积较小,固相抗原与待测抗原的联合抗体时机是不屈等的,靠近次序饱和法,即只要与待测抗原联合剩余的抗体才会与固相抗原联合,异样有1份固相抗原与1份待测抗原竞争1份抗体时,根本上抗领会被待测抗原中和失,与固相抗原联合的抗体十分少。固相抗原的绝对联合率为0%。因而,直接法的克制曲线斜率会大于竞争法。
由于克制率越大则斜率越大,从而敏捷度越大。(假定零管变异5%,以两倍SD为敏捷度限,则为90%绝对联合率,则直接法可以在较低的待测抗原浓度到达这一绝对联合率,因而敏捷度要高。)
在举行体系缩小时,直接法一样平常可以利用酶标二抗。由于二抗可以针反抗体的多个部位,以是存在缩小效应,从而能进步直接法的敏捷度。间接法一样平常难以举行缩小,常用的有生物素化抗原与酶标亲和素,但形式上好像不存在缩小效应。
四、直接法的高敏捷度难以完成的缘故原由:
双抗体夹心的免放(IRMA)形式刚呈现时,也被模子证明敏捷度优于竞争法的放免(RIA),缘故原由也是较大的斜率,但IRMA的高敏捷度不停到单抗开展后才得以完成。直接法的高敏捷度也有实在现的条件,此中有几点最为可疑:
固相抗原与液体抗体的联合位点题目。许多时侯小分子间接包被或多肽包被后与液体抗体联合位点遭到搅扰,亲和力降落。一样平常小分子必需衍生落伍行包被,但仍大概招致亲和力的降落。固相抗原与液体抗体的打仗面积较少,因而必要更永劫间去到达均衡。竞争法的底子在于限量抗体,即两种抗原竞争有限抗体。在直接法里,由于抗原与抗体结触面较少,除非无穷延伸工夫,不然大概只要较少的抗体能被固相抗原捕捉,从而招致终极固相化的酶数目较少,终极的吸光度变低。而在间接法里,固然打仗面是一样的,但一切的抗体都在打仗面上到场反响,以是终极固相化的酶要多一些。3)间接法时抗体先固相化,一样平常是FC联合聚苯乙烯,针对差别抗原位点的抗体都能与标志抗原反响。因而,到场竞争的是针对一切位点的多抗。而直接法时,固相抗原的位点遭到影响,局部抗原位点会消散。这时侯,针对这些位点的抗体将只与待测标本中的抗原反响。待测标本中的抗原必要先将这些抗体中和失,剩余的抗原再与固相抗原竞争剩余的抗体。经过挑选与固相抗原联合力稳定的单抗可以办理这一题目。象棋筛子象棋筛子
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